發(fā)布時(shí)間： 2022-05-23 點(diǎn)擊次數： 935次
細胞培養技術(shù)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細胞培養都是一個(gè)不可少的過(guò)程，細胞培養本身就是細胞的大規?？寺?。細胞培養，既包括微生物細胞的培養，也包擴細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)不可少的環(huán)節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。通過(guò)細胞培養得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。因為生物產(chǎn)品都是從細胞得來(lái)，所以可以說(shuō)細胞培養技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎的技術(shù)。
細胞培養操作過(guò)程：
注意無(wú)菌。無(wú)論哪一管液體，開(kāi)蓋后盡量立即關(guān)上（如果有幾瓶都需要開(kāi)的，也注意，可以虛蓋）。蓋子向上放。操作時(shí)不要從開(kāi)蓋的容器上方經(jīng)過(guò)。另外，無(wú)菌臺面上擺放的各種東西，最好是一字擺開(kāi)，平行于自己。盡量不要前后重疊。
細胞操作中所用的所有耗材試劑最好都是細胞培養專(zhuān)用。一般都以一次性耗材居多。1ML槍頭為加長(cháng)型專(zhuān)用培養槍頭。移液管亦有專(zhuān)用10mL一次性無(wú)菌移液管
?。?）細胞換液：
培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液，加入新培養液。
?。?）細胞傳代：
傳代之前先觀(guān)察，細胞是否密集，是否開(kāi)始融合。一般融合達到70－80%就可以傳代。早點(diǎn)傳代也可以。
如果是貼壁生長(cháng)的細胞：
1） 培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液；
2） 無(wú)菌PBS或無(wú)菌生理鹽水洗滌3次（按培養體積加入）；
3） 加入適量胰酶消化適當時(shí)間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，一次加入1mL胰酶。消化時(shí)間視細胞類(lèi)型等多種情況綜合考慮，一般如果是細胞株，非原代培養，消化1－2分鐘足矣）；
4） 用槍頭吹打數十次（視細胞類(lèi)型而定。一般細胞株30－50次吧，耗時(shí)一般2分鐘左右）；
5） 加入適量體積*培養基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，可以加入1mL*培養基；現在培養瓶（皿）里有2mL溶液）。
6） 現在可以將溶液進(jìn)行分瓶（2mL）。如果是細胞株，直接均分到兩個(gè)培養瓶（皿）里。如果是原代培養，可以根據消化時(shí)間來(lái)對細胞進(jìn)行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉入新的培養瓶（皿）。
7） 將兩個(gè)培養瓶（皿）補足*培養基到正常體積（果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，為5mL*培養液）
8） 鏡下觀(guān)察。剛剛傳代細胞還沒(méi)貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內會(huì )貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據細胞類(lèi)型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。
9） 鏡下觀(guān)察無(wú)誤之后，再放入細胞培養箱。培養瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。
10） 傳代之后，最好第二天細胞換液一次。當然，也可以視情況而定。
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